伯樂Gene Pulser Xcell真核細胞電穿孔系統的標準化操作指南，適用于哺乳動物、植物、真菌等真核細胞的電轉染實驗。請嚴格遵循生物安全與儀器操作規范：

一、 伯樂Gene Pulser Xcell真核細胞電穿孔系統實驗前準備

A、儀器與耗材

1、Gene Pulser Xcell主機、電轉杯槽、電轉杯（建議使用預冷4℃的0.4 cm或0.2 cm間隙電轉杯）

2、電轉緩沖液（如預冷的PBS、HBSS或無血清培養基，低離子強度可減少電弧風險）

3、目標核酸（質粒DNA、siRNA等，需高純度、無菌，溶于低鹽緩沖液如TE）

4、冰浴容器、計時器、移液器及無菌吸頭

B、參數設定

參考常見真核細胞參數范圍（需根據細胞類型優化）

1、電壓：100-500 V（哺乳動物細胞常用200-300 V）

2、電容：500-1000 μF（高電容適用于較大細胞）

3、脈沖次數：1-2次

4、脈沖間隔：≥1 s（若為雙脈沖）

5、波形：選擇指數衰減波（Exponential Decay）

二、伯樂Gene Pulser Xcell真核細胞電穿孔系統操作步驟

1、系統啟動

連接電源，打開主機開關，系統自檢后進入主界面。

2、程序設置

（1）按下"Protocol"鍵，選擇Exponential模式。

（2）輸入目標參數（參考優化后的電壓、電容、脈沖數）。

（3）保存程序（可選）以備重復使用。

3、樣本準備

（1）細胞洗滌：用預冷電轉緩沖液洗滌細胞2次，重懸至目標密度。

（2）混合樣本：將細胞懸液與核酸輕柔混合。

（3）保持樣本全程冰浴（降低細胞代謝，提高存活率）。

4、電轉操作

（1）將混合液轉移至預冷的電轉杯中（避免氣泡，氣泡會導致電弧）。

（2）擦干電轉杯外壁水漬，放入電轉槽（注意正負極方向）。

（3）按下"Pulse"鍵，觀察脈沖放電（伴隨蜂鳴聲）。

（4）屏幕顯示實際電壓與脈沖時間，記錄實際時間常數（τ）。

5、細胞復蘇

（1）電擊后立即將細胞轉入預熱的培養基中。

（2）輕柔吹打混勻，轉移至培養皿，放入37℃ CO?培養箱。

（3）根據實驗目的，在24-72小時后檢測轉染效率。

三、關鍵參數優化建議

1、電壓與電容平衡：

（1）高電壓+低電容 → 適合小細胞（如淋巴細胞）

（2）低電壓+高電容 → 適合大細胞（如成纖維細胞）

2、時間常數（τ）評估：

（1）τ < 5 ms：可能電壓過高或緩沖液離子強度過低

（2）τ > 30 ms：可能電容過高或細胞密度過大

3、細胞狀態控制：

（1）使用低傳代次數細胞（< P20）

（2）電轉前血清饑餓處理可能提高某些細胞系的轉染效率。

四、安全與注意事項

1、電弧預防：

（1）確保電轉杯外壁干燥、無裂痕

（2）避免緩沖液離子濃度過高（推薦使用低電導緩沖液）

（3）核酸樣本避免含酚、乙醇等殘留

2、生物安全：

（1）電轉后廢棄物需按生物危害材料處理

（2）實驗臺面用70%乙醇擦拭，防止核酸污染

3、儀器維護：

（1）定期用乙醇清潔電轉槽

（2）長時間不用時斷開電源

五、常見問題排查

1、細胞存活率低

可能原因：電壓過高/緩沖液不適

解決方案：降低電壓，更換緩沖液優化

2、轉染效率低

可能原因：核酸純度不足/細胞狀態差

解決方案：重新純化核酸，使用新鮮細胞

3、電弧現象

可能原因：電轉杯有氣泡或裂痕

解決方案：輕柔混合，更換新電轉杯

4、儀器無脈沖輸出

可能原因：程序設置錯誤/電容未充電

解決方案：檢查參數設置，重啟儀器