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技術文章

凝膠成像系統操作規程

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這是一份詳細、通用且注重安全的凝膠成像系統操作規程。請在操作前閱讀您所用型號的特定說明書,本規程可作為通用指南和實驗室標準操作程序的模板。


一、凝膠成像系統標準操作規程

1、目的

規范凝膠成像系統的使用操作,確保設備正常運行,獲得高質量成像數據,并保障操作人員安全。

2、適用范圍

適用于本實驗室使用的 [請填寫設備型號,例如:Bio-Rad ChemiDoc MP] 凝膠成像系統,用于對DNA/RNA瓊脂糖凝膠、蛋白質SDS-PAGE凝膠、蛋白印跡膜等進行圖像采集。

3、安全注意事項

(1)紫外線危害:使用紫外光源時,必須始終關閉樣品艙門。紫外線會對眼睛和皮膚造成嚴重傷害。

(2)個人防護:操作含有溴化乙錠等核酸染料的凝膠時,需佩戴實驗手套,避免直接接觸。處理完凝膠后,按實驗室規定丟棄到指定容器。

(3)電氣安全:勿用濕手操作。保持儀器及電腦周圍干燥、清潔。

(4)樣品放置:確認樣品臺/樣品架清潔干燥,避免液體滲入儀器內部。

(5)光源壽命:為延長高強度光源(如白光、激光)壽命,成像結束后應及時關閉光源或退出成像軟件。

4、操作前準備

(1)儀器狀態:打開電腦,啟動凝膠成像系統主機電源,系統自檢(指示燈閃爍)。

(2)軟件啟動:雙擊桌面上的成像軟件圖標(如Image Lab, GelDoc Go等),等待軟件與設備連接就緒。

(3)樣品準備:

凝膠/膜:從電泳槽中取出,用去離子水或相應緩沖液稍作沖洗,去除表面鹽分和氣泡。

放置:將凝膠或膜平鋪在樣品臺的中心位置。對于透射成像,確保凝膠位于透射板中心。

方向標記:建議在凝膠左下角或右下角做一個方向標記(如切角),以便后期識別圖像方向。

(4)選擇成像板/模式:

透射模式:用于常規核酸瓊脂糖凝膠(如EB染色)。將凝膠放在透射板上。

反射模式:用于考馬斯亮藍、銀染的蛋白凝膠或濕態的印跡膜。

熒光/化學發光模式:用于SYBR系列染料、熒光標記抗體或化學發光檢測。通常需要選擇相應波長的激發/發射濾光片組合,并在暗室環境下操作(關閉樣品艙門)。


二、凝膠成像系統標準操作流程

A、步驟一:放置樣品與關閉艙門

1、輕輕打開樣品艙門。

2、將準備好的樣品放置在樣品臺中心。

3、確認樣品放置平整,無氣泡或褶皺。

4、平穩關閉樣品艙門。

B、步驟二:設置成像參數(以軟件控制為例)

1、在軟件界面選擇正確的應用類型(如“凝膠電泳"、“熒光"、“化學發光")。

2、選擇相應的光源和濾光片(如果需要):

白光(反射):用于染色凝膠拍照。

白光(透射):用于EB染色的核酸凝膠。

紫外(302nm或365nm):用于EB、GelRed等染料。(警告:此時艙門必須關閉!)

特定藍光/綠光激發:用于SYBR Safe、SYPRO Ruby等熒光染料。

3、設置曝光時間:

可先使用自動曝光功能,讓軟件推薦一個合適時間。

若自動曝光不理想,切換為手動模式,進行增減調整。目標:條帶清晰,背景不過曝(無白色飽和區域)。

4、調整焦距與對焦:

使用軟件中的“對焦"功能或手動調節鏡頭高度(部分型號),使圖像在預覽窗口中清晰。

對于薄膠,可能需要使用自動對焦功能。

(可選)使用光圈或圖像平均功能減少噪點(尤其適用于低亮度熒光或化學發光)。


三、凝膠成像系統預覽、拍攝與保存

1、點擊“預覽/實時顯示"按鈕,查看參數設置效果。

2、微調曝光時間、對焦等參數,直至滿意。

3、點擊“拍攝/捕獲"按鈕,采集最終圖像。

4、圖像保存:

立即將圖像保存到指定文件夾(建議命名規則:日期_實驗者_樣品名稱_條件)。

保存為無損或高分辨率格式(如.tif, .png),用于后續分析。

同時可保存一份.jpeg格式用于快速查看或插入報告。

5、數據記錄:在實驗記錄本上記錄成像參數(曝光時間、光圈、濾光片等)。


四、凝膠成像系統結束工作

1、從樣品艙中小心取出樣品,妥善處理。

2、用柔軟的濕布或酒精棉片清潔樣品臺和透射板,確保無殘留染料或污漬。

3、在軟件中關閉圖像,退出成像程序。

4、關閉凝膠成像系統主機電源。

5、關閉電腦,整理工作臺。


五、日常維護

1、每次使用后清潔樣品臺。

2、定期用鏡頭紙和氣吹清潔相機鏡頭(頻率根據使用環境而定,通常每季度一次)。

3、避免在儀器上放置重物或灑落液體。

4、長期不使用時,應拔掉電源,并用防塵罩蓋好。


六、常見問題處理

1、圖像模糊:重新對焦;檢查鏡頭或樣品臺是否有水汽/污物。

2、背景不均勻/有污點:清潔樣品臺和透射板。

3、信號太弱/太強:調整曝光時間;檢查光源是否正常;確認是否選擇了正確的濾光片。

4、軟件無法連接設備:檢查所有連接線纜;重啟電腦和設備。

5、遇到無法解決的故障:立即停止操作,報告實驗室負責人或聯系設備工程師,并掛上“待維修"標識。

TEL:18016231680

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